Optimización de las condiciones de derivatización en la determinación de histamina mediante HPLC con detección fluorimétrica

Abstract

Se aborda la determinación de histamina mediante espectrofotometría de fluorescencia molecular. Dado que la histamina no presenta fluorescencia natural, se ha derivatizado con cloruro de dansilo y, debido a la interferencia de éste sobre la emisión fluorescente de la histamina, se ha recurrido a una técnica cromatográfica (HPLC) para separar las señales. En una primera parte del trabajo se han optimizado las variables experimentales más influyentes en la derivatización (pH, temperatura y tiempo) mediante el uso de un diseño central compuesto. Una vez optimizada esa etapa del análisis, se han comparado dos métodos de análisis que emplean longitudes de onda de excitación diferentes en la detección fluorimétrica. Dicha comparación se ha llevado a cabo a través de las distintas figuras de mérito que se han estimado. El procedimiento puesto a punto tiene una capacidad de detección (CC) de 106 ppb, con probabilidades de falso positivo y falso negativo de 0.05.

The aim of this work was the determination of histamine through molecular fluorescence spectrophotometry. Since histamine does not exhibit native fluorescence, it was derivatized with dansyl chloride and, due to the interference of this on the fluorescent emission of histamine, a chromatographic technique (HPLC) was used to separate the signals. Firstly, the experimental variables that most influence the derivatization (pH, temperature and time) were optimized by using a central composite design. Once this stage of the analysis was optimized, two methods of analysis which used different excitation wavelengths for the fluorimetric detection were compared. The comparison was performed through different figures of merit which were estimated. The developed procedure has a capability of detection (CC) of 106 ppb, false negative and false probabilities being 0.05.